Jak vyrobit bramborový dextrózový agar
Věci, které budete potřebovat
300 g loupaných nakrájených brambor
Pánev
Kuchyňské sítko nebo sýrová tkanina
Testovací papír na pH nebo pH metr
1 molární kyselina chlorovodíková
1 molární hydroxid sodný
4 500ml skleněné baňky Ehrlenmayer (nebo jiné autoklávovatelné nádoby s úzkým hrdlem)
10 g dextrózového (glukózového) prášku
20 g agaru
Hliníková fólie
Tlakový hrnec
Sterilní Petriho misky
Spropitné
Většina hub je v mírně kyselých podmínkách dobře, takže konečné pH by mělo být mezi 6 a 6,5, i když může být upraveno na jakékoli pH, které je požadováno pro konkrétní druh. Víčka Petriho misky držte otevřená dostatečně daleko, aby bylo možné nalít médium a zakrýt co nejrychleji. Získání rychlosti a účinnosti při nalévání agaru do Petriho misek vyžaduje určitou praxi. Po ochlazení a ztuhnutí mohou být desky PDA zabaleny do plastu a měsíce skladovány v lednici. Většina vodovodní vody obsahuje minerály prospěšné pro růst hub; pokud však má místní voda extrémní minerální koncentrace nebo má velmi vysoké nebo nízké pH, vyměňte destilovanou vodu.
Varování
Dodržujte všechny provozní a bezpečnostní pokyny pro použitý model tlakového hrnce. Při sterilizaci v tlakovém hrnci nechte víčka baňky uvolněné, aby nedošlo k přetlakování. Při manipulaci s horkými médii používejte rukavice odolné vůči teplu. Při práci s tlakovým vařičem, sejmutím sterilizovaného PDA a během lití noste ochranné brýle.
Obrázek Kredit: Zedcor zcela vlastní / PhotoObjects.net / Getty Images
Bramborový dextrózový agar (PDA) je dobré univerzální polotuhé médium používané pro kultivaci hub. Často se používá k izolaci, růstu a údržbě hubotvorných druhů. Lze připravit hotové Petriho misky nebo zkumavky obsahující PDA nebo PDA lze rychle vyrobit pomocí komerční premixu. Není však těžké vytvořit jednoduchou a účinnou verzi od nuly za nízkou cenu.
Příprava bramborového extraktu
Krok 1
Vložte brambory do hrnce s přibližně 1,2 litru vodovodní vody a vařte na sporáku po dobu 1 hodiny.
Krok 2
Odstraňte pánev z tepla a nechte kapalinu vychladnout, dokud se s ním nebude pohodlně manipulovat (asi 10 minut).
Krok 3
Kapalný bramborový extrakt nalijte přes sítko nebo tenká a sbírejte jej do jiné nádoby.
Příprava média
Krok 1
Přidá se dextróza a agar do 1 litru vody z bramborového extraktu.
Krok 2
Zkoušejte pH roztoku pomocí papírku na testování pH nebo pH metru.
Krok 3
Pokud je hodnota pH nad 6,5, upravte ji přidáním jedné kapky roztoku kyseliny chlorovodíkové najednou a opakovaným testováním.
Krok 4
Pokud je pH pod 6, upravte jej přidáním jedné kapky roztoku hydroxidu sodného najednou a opakovaným testováním.
Sterilizace
Krok 1
Médium důkladně promíchejte a rozdělte do menších šarží po 250 ml nalitých do čtyř 500ml baněk (Poznámka: každá baňka nesmí být více než polovina plná, aby nedošlo k převaření).
Krok 2
Každou baňku zakryjte kouskem volně zalisované hliníkové fólie, aby fólie nespadla, ale neudělala těsné utěsnění.
Krok 3
Vložte baňky do tlakového hrnce.
Krok 4
Provozujte tlakový vařič v souladu s pokyny výrobce a sterilizujte PDA při 121 ° C (250 ° F) při tlaku 103 421 Pascal (15 PSI) po dobu 15 minut.
Krok 5
Vypněte tlakový vařič a nechte jej vrátit se na atmosférický tlak, poté vyjměte baňky a nechte je vychladnout, dokud s nimi nebude možné manipulovat.
Lití média
Krok 1
Sterilní Petriho misky postavte na rovný povrch.
Krok 2
Jakmile se baňky ochladily na manipulační teplotu, ale než médium začalo tuhnout, jednou rukou uchopte baňku a druhou rukou sejměte a odložte fóliové víko.
Krok 3
U každé Petriho misky zvedněte víko jednou rukou, rychle napůl naplňte tekutým PDA a víko nasaďte zpět.
Krok 4
Opakujte výše uvedený krok 3, dokud nejsou všechna Petriho misky naplněna.
Krok 5
Pokud zbývá nějaký PDA, baňku volně uvolněte s jejím původním fóliovým víčkem, nechte ji vychladnout a ztuhnout, utáhněte fóliové víko a uložte do chladničky.