Sådan fremstilles kartoffeldekstrose agar
Ting, du har brug for
300 g skrællede, hakkede kartofler
Saucepan
Køkkenfilter eller osteduk
pH-testpapir eller pH-meter
1 mol saltsyre
1 molært natriumhydroxid
4 500 ml Ehrlenmayer-kolber (eller andre smalt mundede autoklaverbare containere)
10 g dextrose (glucose) pulver
20 g agar
Sølvpapir
Trykkoger
Sterile petriskåle
Tip
De fleste svampe klarer sig godt under let sure forhold, så den endelige pH-værdi skal være mellem 6 og 6,5, selvom den kan justeres til, uanset hvilken pH-værdi der kræves for en bestemt art. Hold petri parabol låg åben lige langt nok til at lade medium hældes ind og dæk så hurtigt som muligt. Det kræver lidt praksis at få hastighed og effektivitet ved at hælde agar i petriskåle. Efter afkøling og størkning kan PDA-plader indpakkes i plast og opbevares i køleskab i måneder. De fleste ledningsvand indeholder mineraler, der er gavnlige for svampevækst; dog, hvis lokalt vand har ekstreme mineralkoncentrationer eller har en meget høj eller lav pH, skal destilleret vand erstattes.
Advarsel
Følg alle betjenings- og sikkerhedsinstruktioner for den model, der bruges. Lad kolben låg være løse, når de steriliseres i trykskabet for at undgå overtryk. Brug varmebestandige handsker, når du håndterer mediebeholdere. Bær beskyttelsesbriller, når man betjener trykkogeren, fjerner steriliseret PDA og under hældning.
Billedkredit: Zedcor 100% ejet / PhotoObjects.net / Getty Images
Potato dextrose agar (PDA) er et godt halvt fast medium til almindeligt brug, der anvendes til dyrkning af svampe. Det bruges ofte til at isolere, vokse og vedligeholde svampedannende arter. Færdiglavede petriskåle eller reagensglas indeholdende PDA kan købes, eller PDA kan hurtigt fremstilles ved hjælp af en kommerciel forblanding. Det er dog ikke svært at lave en enkel og effektiv version fra bunden til lave omkostninger.
Forberedelse af kartoffelekstrakt
Trin 1
Anbring kartofler i en gryde med cirka 1,2 liter vand fra vandet og kog på en komfur i 1 time.
Trin 2
Fjern gryden fra varmen, og lad væsken afkøle, indtil den kan håndteres behageligt (ca. 10 minutter).
Trin 3
Hæld flydende kartoffelekstrakt gennem en sil eller osteduk og opsamle den i en anden beholder.
Klargøring af mediet
Trin 1
Tilsæt dextrose og agar til 1 liter kartoffelekstraktvand.
Trin 2
Test opløsningens pH med pH-testpapir eller et pH-meter.
Trin 3
Hvis pH er over 6,5, skal du justere den ved at tilsætte en dråbe saltsyreopløsning ad gangen og prøve igen.
Trin 4
Hvis pH-værdien er under 6, skal du justere den ved at tilsætte en dråbe natriumhydroxidopløsning ad gangen og prøve igen.
sterilisation
Trin 1
Bland mediet grundigt, og del det op i mindre portioner på 250 ml hældt i de fire 500 ml kolber (Bemærk: hver kolbe må ikke være mere end halvt for at undgå kogning over).
Trin 2
Dæk hver kolbe med et stykke løst sammenkrøbt aluminiumsfolie, så folien ikke falder af, men ikke får en tæt tætning.
Trin 3
Placer kolberne i en komfur.
Trin 4
Betjen komfuret i overensstemmelse med producentens instruktioner om sterilisering af PDA ved 121 grader C (250 grader F) ved et tryk på 103.421 Pascals (15 PSI) i 15 minutter.
Trin 5
Sluk for komfuret, og lad det vende tilbage til atmosfærisk tryk, fjern derefter kolberne og lad dem afkøle, indtil de kan håndteres.
Hælde mediet
Trin 1
Stil de sterile petriskåle op på en plan overflade.
Trin 2
Når kolberne er afkølet til håndteringstemperatur, men inden mediet begynder at stivne, skal du gribe fat i en kolbe med den ene hånd og fjerne det og sæt dets foliedæksel til side med den anden hånd.
Trin 3
Løft låget med en hånd til hver petriskål, fyld hurtigt halvvejs med flydende PDA og udskift låget.
Trin 4
Gentag trin 3 ovenfor, indtil alt petriskål er fyldt.
Trin 5
Hvis der er noget PDA tilbage, skal kolben løst løsnes med det originale folielåg, lad det afkøle og størkne, spænd foliedækslet og opbevares i køleskab.