Cómo hacer agar papa dextrosa
Cosas que necesitarás
300 g de papas peladas y picadas
Cacerola
Colador de cocina o gasa
papel de prueba de pH o medidor de pH
Ácido clorhídrico 1 molar
Hidróxido de sodio 1 molar
4 matraces de vidrio Ehrlenmayer de 500 ml (u otros recipientes autoclavables de boca estrecha)
10 g de polvo de dextrosa (glucosa)
20 g de agar
Papel de aluminio
Olla a presión
Placas de Petri estériles
Propina
La mayoría de los hongos funcionan bien en condiciones ligeramente ácidas, por lo que el pH final debe estar entre 6 y 6.5, aunque puede ajustarse al pH que se requiera para una especie específica. Mantenga abiertas las tapas de la placa de Petri lo suficiente como para permitir que se vierta el medio y cubra lo más rápido posible. Se necesita algo de práctica para ganar velocidad y eficiencia al verter agar en placas de Petri. Después de enfriar y solidificar, las placas PDA pueden envolverse en plástico y almacenarse en el refrigerador durante meses. La mayoría del agua del grifo contiene minerales beneficiosos para el crecimiento de hongos; sin embargo, si el agua local tiene concentraciones minerales extremas o tiene un pH muy alto o bajo, sustituya el agua destilada.
Advertencia
Siga todas las instrucciones de operación y seguridad para el modelo de olla a presión que se utiliza. Deje sueltas las tapas de los matraces cuando esterilice en la olla a presión para evitar la sobrepresión. Use guantes resistentes al calor al manipular contenedores de medios calientes. Use anteojos de seguridad cuando opere la olla a presión, retire el PDA esterilizado y durante el vertido.
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El agar de papa dextrosa (PDA) es un buen medio semisólido de uso general utilizado para el cultivo de hongos. A menudo se usa para aislar, cultivar y mantener especies formadoras de hongos. Se pueden comprar placas de Petri preparadas o tubos de ensayo que contienen PDA, o se puede hacer PDA rápidamente usando una premezcla comercial. Sin embargo, no es difícil hacer una versión simple y efectiva desde cero a bajo costo.
Preparar extracto de papa
Paso 1
Coloque las papas en una cacerola con aproximadamente 1,2 litros de agua del grifo y hierva en una estufa durante 1 hora.
Paso 2
Retire la cacerola del fuego y deje que el líquido se enfríe hasta que pueda manipularse cómodamente (aproximadamente 10 minutos).
Paso 3
Vierta el extracto líquido de papa a través de un colador o una gasa y recójalo en otro recipiente.
Preparando el medio
Paso 1
Agregue dextrosa y agar a 1 litro de agua de extracto de papa.
Paso 2
Pruebe el pH de la solución con papel de prueba de pH o un medidor de pH.
Paso 3
Si el pH está por encima de 6.5, ajústelo agregando una gota de la solución de ácido clorhídrico a la vez y vuelva a probar.
Paso 4
Si el pH está por debajo de 6, ajústelo agregando una gota de la solución de hidróxido de sodio a la vez y vuelva a realizar la prueba.
Esterilización
Paso 1
Mezcle bien el medio y divídalo en lotes más pequeños de 250 ml vertidos en los cuatro matraces de 500 ml (Nota: cada matraz no debe tener más de la mitad para evitar que hierva).
Paso 2
Cubra cada matraz con un trozo de papel de aluminio ligeramente ondulado, para que el papel no se caiga, pero no selle herméticamente.
Paso 3
Coloque los matraces en una olla a presión.
Paso 4
Opere la olla a presión de acuerdo con las instrucciones del fabricante para esterilizar el PDA a 121 grados C (250 grados F) a una presión de 103,421 Pascales (15 PSI) durante 15 minutos.
Paso 5
Apague la olla a presión y deje que vuelva a la presión atmosférica, luego retire los matraces y deje que se enfríen hasta que puedan manipularse.
Vertiendo el medio
Paso 1
Alinee las placas de Petri estériles en una superficie plana.
Paso 2
Una vez que los matraces se hayan enfriado a la temperatura de manipulación, pero antes de que el medio comience a solidificarse, tome un matraz con una mano y retírelo y reserve la tapa de aluminio con la otra mano.
Paso 3
Para cada placa de Petri, levante la tapa con una mano, llene rápidamente hasta la mitad con PDA líquido y vuelva a colocar la tapa.
Paso 4
Repita el paso 3 anterior hasta que todos los platos de Petri estén llenos.
Paso 5
Si queda algo de PDA, recupere sin apretar el matraz con su tapa de aluminio original, déjelo enfriar y solidifique, apriete la tapa de aluminio y guárdelo en el refrigerador.