Comment faire de la gélose au dextrose de pomme de terre
Choses dont vous aurez besoin
300 g de pommes de terre pelées et hachées
Casserole
Passoire de cuisine ou étamine
Papier de test de pH ou pH-mètre
1 acide chlorhydrique molaire
Hydroxyde de sodium 1 molaire
4 flacons en verre Ehrlenmayer de 500 ml (ou autres récipients autoclavables à col étroit)
10 g de dextrose (glucose) en poudre
20 g d'agar
Feuille d'aluminium
Cocotte minute
Boîtes de Pétri stériles
Pointe
La plupart des champignons se portent bien dans des conditions légèrement acides, donc le pH final doit être compris entre 6 et 6,5, bien qu'il puisse être ajusté au pH requis pour une espèce spécifique. Maintenez les couvercles de boîte de Pétri ouverts juste assez loin pour permettre au milieu d'être versé et couvrir le plus rapidement possible. Il faut un peu de pratique pour gagner en vitesse et en efficacité en versant de l'agar dans des boîtes de Pétri. Après refroidissement et solidification, les plaques PDA peuvent être emballées dans du plastique et conservées au réfrigérateur pendant des mois. La plupart de l'eau du robinet contient des minéraux bénéfiques pour la croissance fongique; cependant, si l'eau locale a des concentrations minérales extrêmes ou a un pH très élevé ou bas, remplacez l'eau distillée.
Attention
Suivez toutes les instructions de fonctionnement et de sécurité pour le modèle d'autocuiseur utilisé. Laissez les couvercles des flacons desserrés lors de la stérilisation dans l'autocuiseur pour éviter une surpression. Utilisez des gants résistants à la chaleur lors de la manipulation de récipients à milieu chaud. Portez des lunettes de sécurité lorsque vous utilisez l'autocuiseur, retirez le PDA stérilisé et pendant le versement.
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La gélose au dextrose de pomme de terre (PDA) est un bon milieu semi-solide à usage général utilisé pour la culture des champignons. Il est souvent utilisé pour isoler, faire pousser et maintenir des espèces formant des champignons. Des boîtes de Pétri prêtes à l'emploi ou des tubes à essai contenant du PDA peuvent être achetés, ou le PDA peut être rapidement fabriqué en utilisant un prémélange commercial. Cependant, il n'est pas difficile de faire une version simple et efficace à partir de zéro à peu de frais.
Préparer l'extrait de pomme de terre
Étape 1
Placer les pommes de terre dans une casserole avec environ 1,2 litre d'eau du robinet et faire bouillir sur une cuisinière pendant 1 heure.
Étape 2
Retirer la casserole du feu et laisser refroidir le liquide jusqu'à ce qu'il puisse être manipulé confortablement (environ 10 minutes).
Étape 3
Versez l'extrait de pomme de terre liquide à travers une passoire ou une étamine et récupérez-le dans un autre récipient.
Préparation du médium
Étape 1
Ajouter le dextrose et la gélose à 1 litre d'eau d'extrait de pomme de terre.
Étape 2
Testez le pH de la solution avec du papier de test de pH ou un pH-mètre.
Étape 3
Si le pH est supérieur à 6,5, ajustez-le vers le bas en ajoutant une goutte de la solution d'acide chlorhydrique à la fois et en retestant.
Étape 4
Si le pH est inférieur à 6, ajustez-le en ajoutant une goutte de la solution d'hydroxyde de sodium à la fois et en retestant.
Stérilisation
Étape 1
Mélanger soigneusement le milieu et le diviser en lots plus petits de 250 ml versés dans les quatre flacons de 500 ml (Remarque: chaque flacon ne doit pas être rempli à plus de la moitié pour éviter de déborder).
Étape 2
Couvrir chaque flacon avec un morceau de papier d'aluminium à sertissage lâche, afin que le papier ne tombe pas, mais ne fasse pas un joint étanche.
Étape 3
Placer les flacons dans un autocuiseur.
Étape 4
Faire fonctionner l'autocuiseur conformément aux instructions du fabricant pour stériliser le PDA à 121 degrés C (250 degrés F) à une pression de 103 421 Pascals (15 PSI) pendant 15 minutes.
Étape 5
Arrêtez l'autocuiseur et laissez-le revenir à la pression atmosphérique, puis retirez les flacons et laissez-les refroidir jusqu'à ce qu'ils puissent être manipulés.
Verser le médium
Étape 1
Alignez les boîtes de Pétri stériles sur une surface plane.
Étape 2
Une fois que les flacons ont refroidi à la température de manipulation, mais avant que le milieu ne commence à se solidifier, saisir une fiole d'une main et retirer et mettre de côté son couvercle en aluminium avec l'autre main.
Étape 3
Pour chaque boîte de Pétri, soulevez le couvercle d'une main, remplissez rapidement à mi-chemin de PDA liquide et replacez le couvercle.
Étape 4
Répétez l'étape 3 ci-dessus jusqu'à ce que toutes les boîtes de Pétri soient remplies.
Étape 5
S'il reste un PDA, récupérez sans serrer le ballon avec son couvercle en aluminium d'origine, laissez-le refroidir et se solidifier, serrez le couvercle en aluminium et conservez-le au réfrigérateur.