Hogyan készítsünk burgonya dextróz-agart?
Amire szüksége lesz
300 g hámozott, apróra vágott burgonyát
Lábas
Konyhai szűrő vagy sajtkendő
pH-tesztpapír vagy pH-mérő
1 mólos sósav
1 mol nátrium-hidroxid
4 500 ml-es üveg Ehrlenmayer-lombik (vagy más keskeny szájú autoklávozható tartály)
10 g dextróz (glükóz) por
20 g agar
Alufólia
Kukta
Steril Petri-csészék
Tipp
A legtöbb gombának enyhén savas körülmények között is jól van, tehát a végső pH-értéknek 6 és 6,5 között kell lennie, bár az adott fajhoz szükséges pH-értékre beállítható. A Petri-csészék fedeleit csak annyira nyitva kell tartani, hogy a tápközeget be lehessen önteni, és a lehető leggyorsabban lefedjék. Néhány gyakorlat szükséges ahhoz, hogy az agar a Petri-csészékbe öntsék a sebességet és a hatékonyságot. Lehűlés és megszilárdulás után a PDA lemezeket műanyagba csomagolhatjuk és hónapokig hűtőszekrényben tárolhatjuk. A legtöbb csapvíz ásványi anyagokat tartalmaz, amelyek kedvezőek a gombák növekedésére; ha azonban a helyi víz extrém ásványi koncentrációval rendelkezik vagy nagyon magas vagy alacsony pH-értékű, cserélje ki a desztillált vizet.
Figyelem
Kövesse az összes üzemeltetési és biztonsági utasítást a használt főzőlap modelljére. A túlnyomás elkerülése érdekében hagyja lazán a lombik fedeleit, ha sterilizálják a főzőlapon. A forró hordozókonténerek kezelésekor használjon hőálló kesztyűt. A főzőlap működtetése, a sterilizált PDA eltávolítása és az öntés során viseljen védőszemüveget.
Kép jóváírás: Teljesen Zedcor / PhotoObjects.net / Getty Images
A burgonya-dextróz-agar (PDA) jó általános célú félszilárd táptalaj a gombák tenyésztésére. Gyakran használják gombaképző fajok izolálására, szaporítására és fenntartására. PDA-t tartalmazó kész Petri-csészék vagy tesztcsövek vásárolhatók, vagy a PDA-k gyorsan előállíthatók egy kereskedelmi premix használatával. Ugyanakkor nem nehéz egy egyszerű és hatékony verziót a semmiből kis költséggel elkészíteni.
Burgonya kivonat elkészítése
1. lépés
Helyezze a burgonyát egy serpenyőbe, körülbelül 1,2 liter csapvízzel, és főzze a tűzhelyen 1 órán át.
2. lépés
Távolítsa el a serpenyőt a tűzről, és hagyja lehűlni a folyadékot, amíg kényelmesen kezelhető (kb. 10 perc).
3. lépés
Öntsön folyékony burgonya kivonatot szűrőn vagy sajtkendőn, és gyűjtse össze egy másik tartályba.
A közeg előkészítése
1. lépés
Adjunk hozzá dextrózt és agart 1 liter burgonyakivonat-vízhez.
2. lépés
Vizsgálja meg az oldat pH-ját pH-tesztpapírral vagy pH-mérővel.
3. lépés
Ha a pH-érték 6,5 felett van, állítsa be úgy, hogy egy csepp sósavoldatot egyszerre ad hozzá és ismételje meg a tesztet.
4. lépés
Ha a pH-érték 6 alatt van, állítsa be úgy, hogy egyszerre egy csepp nátrium-hidroxid-oldatot adagol és újra tesztel.
Sterilizáció
1. lépés
Alaposan keverje össze a tápközeget, és ossza meg kisebb, 250 ml-es tételekbe, amelyeket a négy 500 ml-es lombikba öntött (Megjegyzés: az egyes lombikoknak nem lehetnek felére több, mint fele, hogy elkerüljék a forralást).
2. lépés
Minden lombikot fedje le lazán ráncolt alumínium fóliával, hogy a fólia ne essen le, de ne szorosan zárja le.
3. lépés
Helyezze a lombikot egy főzőlapra.
4. lépés
Működtesse a nyomásfőzőt a gyártó utasításainak megfelelően, hogy 15 percig sterilizálja a PDA-t 121 ° C (250 fok) hőmérsékleten, 103 421 paszkal (15 PSI) nyomáson.
5. lépés
Kapcsolja ki a főzőlapot, és hagyja, hogy az visszatérjen a légköri nyomáshoz, majd vegye ki a lombikot, és hagyja lehűlni, amíg kezelhetővé nem válik.
A közeg öntése
1. lépés
Helyezze a steril Petri-csészéket egy sima felületre.
2. lépés
Miután a lombikok a hőmérsékletre lehűltek, de a közeg megszilárdulni kezdettől fogva, egyik kezével fogja meg a lombikot, a másik kezével vegye le és tegye félre a fólia fedelét.
3. lépés
Mindegyik Petri-csészéhez emelje fel egyik kezével a fedelet, gyorsan töltse fel félig folyékony PDA-val és cserélje ki a fedelet.
4. lépés
Ismételje meg a fenti 3. lépést, amíg az összes Petri-tál feltöltődik.
5. lépés
Ha marad PDA, lazán vegye vissza a lombikot az eredeti fólia fedéllel, hagyja lehűlni és megszilárduljon, húzza meg a fólia fedelét és tárolja hűtőszekrényben.