Come preparare l'agar di destrosio di patate
Le cose che ti serviranno
300 g di patate pelate e tritate
Casseruola
Filtro da cucina o garza
pH test paper o pHmetro
1 acido cloridrico molare
1 idrossido di sodio molare
4 matracci in vetro Ehrlenmayer da 500 ml (o altri contenitori autoclavabili a bocca stretta)
10 g di destrosio (glucosio) in polvere
20 g di agar
Foglio di alluminio
Pentola a pressione
Capsule di Petri sterili
Mancia
La maggior parte dei funghi si comporta bene in condizioni leggermente acide, quindi il pH finale dovrebbe essere compreso tra 6 e 6,5, sebbene possa essere adattato al pH richiesto per una specie specifica. Tenere i coperchi della capsula di Petri aperti abbastanza da consentire il versamento del materiale e coprire il più rapidamente possibile. Ci vuole un po 'di pratica per ottenere velocità ed efficienza nel versare l'agar in piastre di Petri. Dopo il raffreddamento e la solidificazione, le piastre di PDA possono essere avvolte in plastica e conservate in frigorifero per mesi. La maggior parte dell'acqua di rubinetto contiene minerali utili per la crescita di funghi; tuttavia, se l'acqua locale ha concentrazioni minerali estreme o ha un pH molto alto o basso, sostituire l'acqua distillata.
avvertimento
Seguire tutte le istruzioni operative e di sicurezza per il modello di pentola a pressione in uso. Lasciare i coperchi del pallone allentati durante la sterilizzazione nella pentola a pressione per evitare la sovrapressurizzazione. Usare guanti resistenti al calore quando si maneggiano contenitori di supporti caldi. Indossare occhiali di sicurezza quando si utilizza la pentola a pressione, rimuovendo il PDA sterilizzato e durante il versamento.
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L'agar di destrosio di patata (PDA) è un buon mezzo semisolido di uso generale utilizzato per la coltura di funghi. Viene spesso usato per isolare, crescere e mantenere specie che formano funghi. È possibile acquistare piastre di Petri o provette già pronte contenenti PDA oppure è possibile realizzare rapidamente PDA utilizzando una premiscela commerciale. Tuttavia, non è difficile creare una versione semplice ed efficace da zero a basso costo.
Preparare l'Estratto Di Patate
Passo 1
Mettere le patate in una casseruola con circa 1,2 litri di acqua di rubinetto e far bollire su una stufa per 1 ora.
Passo 2
Rimuovi la casseruola dal fuoco e lascia raffreddare il liquido fino a quando può essere maneggiato comodamente (circa 10 minuti).
Passaggio 3
Versare l'estratto di patate liquide attraverso un colino o una garza e raccoglierlo in un altro contenitore.
Preparare il mezzo
Passo 1
Aggiungi destrosio e agar a 1 litro di acqua di estratto di patata.
Passo 2
Testare il pH della soluzione con carta per test del pH o un pHmetro.
Passaggio 3
Se il pH è superiore a 6,5, regolarlo verso il basso aggiungendo una goccia di soluzione di acido cloridrico alla volta e ripetere il test.
Passaggio 4
Se il pH è inferiore a 6, aggiustarlo aggiungendo una goccia di soluzione di idrossido di sodio alla volta e ripetere il test.
Sterilizzazione
Passo 1
Miscelare accuratamente il terreno e dividerlo in lotti più piccoli di 250 mL versati nei quattro matracci da 500 mL (Nota: ogni pallone deve essere non più della metà pieno per evitare che bolle).
Passo 2
Coprire ogni pallone con un pezzo di foglio di alluminio leggermente aggraffato, in modo che il foglio non cada, ma non sigilli.
Passaggio 3
Metti le boccette in una pentola a pressione.
Passaggio 4
Azionare la pentola a pressione secondo le istruzioni del produttore per sterilizzare il PDA a 121 ° C (250 ° F) a una pressione di 103,421 Pascal (15 PSI) per 15 minuti.
Passaggio 5
Spegnere la pentola a pressione e lasciarla tornare alla pressione atmosferica, quindi rimuovere le boccette e lasciarle raffreddare fino a quando non possono essere maneggiate.
Versare il mezzo
Passo 1
Allineare le piastre di Petri sterili su una superficie piana.
Passo 2
Una volta che le boccette si sono raffreddate fino alla temperatura di manipolazione, ma prima che il mezzo inizi a solidificarsi, afferrare un pallone con una mano e rimuovere e mettere da parte il coperchio di alluminio con l'altra mano.
Passaggio 3
Per ogni capsula di Petri, sollevare il coperchio con una mano, riempire rapidamente a metà con il PDA liquido e sostituire il coperchio.
Passaggio 4
Ripetere il passaggio 3 sopra fino a riempire tutte le capsule di Petri.
Passaggio 5
Se è rimasto del PDA, recuperare liberamente il pallone con il coperchio originale, lasciarlo raffreddare e solidificare, stringere il coperchio e conservare in frigorifero.