Kaip pasidaryti bulvių dekstrozės agarą
Reikalingi dalykai
300 g nuluptų, supjaustytų bulvių
Padažas
Virtuvės įdaras arba varškė
pH bandymo popierius arba pH matuoklis
1 molinė druskos rūgštis
1 molinis natrio hidroksidas
4 500 ml stiklinės Ehrlenmayerio kolbos (arba kitos siauromis durimis autoklavuojamos talpyklos)
10 g dekstrozės (gliukozės) miltelių
20 g agaro
Aliuminio folija
Slėginė viryklė
Sterilūs Petri patiekalai
Patarimas
Daugelis grybų gerai veikia silpnai rūgštinėmis sąlygomis, todėl galutinis pH turėtų būti nuo 6 iki 6,5, nors jį galima sureguliuoti taip, kad būtų reikalingas konkrečios rūšies pH. „Petri“ lėkščių dangčius laikykite atidarytus pakankamai toli, kad terpė galėtų būti pilama ir kuo greičiau uždengtų. Norint įgyti agaro į Petri lėkštes, reikia šiek tiek praktikos, kad būtų galima greičiau ir efektyviau įgyti. Atvėsus ir sukietėjus PDA plokšteles galima įvynioti į plastiką ir keletą mėnesių laikyti šaldytuve. Daugumoje vandentiekio vandens yra mineralų, naudingų grybeliui augti; tačiau jei vietiniame vandenyje yra nepaprastai mineralinių medžiagų koncentracija arba jo pH yra labai aukštas ar žemas, pakeiskite distiliuotą vandenį.
Įspėjimas
Laikykitės visų naudojamo slėginės viryklės modelio naudojimo ir saugos instrukcijų. Norėdami išvengti per didelio slėgio, kolbos dangčius palikite laisvus, kai sterilizuojate greitpuodyje. Dirbdami su karštos terpės konteineriais, naudokite karščiui atsparias pirštines. Dirbdami slėgine virykle, išimdami sterilų PDA ir pildami, mūvėkite apsauginius akinius.
Vaizdo kreditas: Visiškai priklausantys „Zedcor“ / PhotoObjects.net / „Getty Images“
Bulvių dekstrozės agaras (PDA) yra gera bendrosios paskirties pusiau kieta terpė, naudojama grybeliams auginti. Jis dažnai naudojamas grybus formuojančioms rūšims išskirti, auginti ir prižiūrėti. Galima įsigyti paruoštų Petri patiekalų ar mėgintuvėlių, kuriuose yra PDA, arba PDA greitai pagaminti naudojant komercinį premiksą. Tačiau nėra lengva padaryti paprastą ir efektyvią versiją nuo nulio už nedidelę kainą.
Bulvių ekstrakto paruošimas
1 žingsnis
Įdėkite bulves į lėkštę su maždaug 1,2 litrais vandentiekio vandens ir virkite ant viryklės 1 valandą.
2 žingsnis
Nuimkite puodą nuo ugnies ir leiskite skysčiui atvėsti, kol jis bus patogiai naudojamas (maždaug 10 minučių).
3 žingsnis
Skystą bulvių ekstraktą perpilkite per sietelį ar varškę ir surinkite į kitą indą.
Terpės paruošimas
1 žingsnis
Įpilkite dekstrozės ir agaro į 1 litrą bulvių ekstrakto vandens.
2 žingsnis
Patikrinkite tirpalo pH pH bandymo popieriumi arba pH matuokliu.
3 žingsnis
Jei pH yra didesnis kaip 6,5, sureguliuokite jį, pridėdami po vieną lašą druskos rūgšties tirpalo ir pakartotinai atlikdami bandymą.
4 žingsnis
Jei pH yra mažesnis nei 6, sureguliuokite jį, įlašindami vieną lašą natrio hidroksido tirpalo vienu metu ir dar kartą atlikdami bandymą.
Sterilizacija
1 žingsnis
Kruopščiai sumaišykite terpę ir padalinkite ją į mažesnes 250 ml dalis, supilamas į keturias 500 ml talpos kolbas (pastaba: kiekviena kolba turi būti ne daugiau kaip pusė užpildytos, kad neužvirstų).
2 žingsnis
Kiekvieną kolbą uždenkite laisvai susuktos aliuminio folijos gabalėliu, kad folija nenukristų, tačiau neužsandarintų.
3 žingsnis
Kolbos dedamos į greitpuodį.
4 žingsnis
Įjunkite slėginę viryklę pagal gamintojo instrukcijas, kad 15 minučių sterilizuotumėte PDA 121 laipsnių C (250 laipsnių F), esant 103 421 Paskalio (15 PSI) slėgiui.
5 žingsnis
Išjunkite slėginę viryklę ir leiskite jai grįžti prie atmosferos slėgio, tada išimkite kolbas ir leiskite joms atvėsti, kol jas bus galima naudoti.
Pilstymo terp
1 žingsnis
Sterilius Petri lėkšteles ištieskite ant lygaus paviršiaus.
2 žingsnis
Kolboms atvėsus iki darbinės temperatūros, bet dar nepradėjus kietėti, viena ranka suimkite kolbą, kita ranka nuimkite ir atidėkite jos folijos dangtį.
3 žingsnis
Kiekvienai „Petri“ lėkštelei viena ranka pakelkite dangtį, greitai iki pusės užpildykite skystu PDA ir uždarykite dangtį.
4 žingsnis
Pakartokite 3 veiksmą aukščiau, kol užpildysite visus petrio indus.
5 žingsnis
Jei neliko PDA, atsargiai išgerkite kolbą su originaliu folijos dangteliu, leiskite jai atvėsti ir sukietėti, užsukite folijos dangtį ir laikykite šaldytuve.