Jak zrobić agar z dekstrozą ziemniaczaną
Rzeczy, których będziesz potrzebować
300 g obranych, pokrojonych ziemniaków
Rondel
Sitko kuchenne lub ściereczka do sera
Papier testowy lub miernik pH
1 molowy kwas chlorowodorowy
1 molowy wodorotlenek sodu
4 500-ml szklane kolby Ehrlenmayera (lub inne wąskoszyjne autoklawowalne pojemniki)
10 g proszku dekstrozy (glukozy)
20 g agaru
Folia aluminiowa
Szybkowar
Sterylne szalki Petriego
Wskazówka
Większość grzybów radzi sobie dobrze w lekko kwaśnych warunkach, więc końcowe pH powinno wynosić od 6 do 6,5, chociaż można je dostosować do pH wymaganego dla określonego gatunku. Przytrzymaj pokrywki szalki Petriego otwarte wystarczająco daleko, aby umożliwić wlanie medium i przykryć tak szybko, jak to możliwe. Potrzeba trochę praktyki, aby uzyskać szybkość i wydajność wlewania agaru do szalek Petriego. Po schłodzeniu i zestaleniu płytki PDA można owinąć w plastik i przechowywać przez kilka miesięcy w lodówce. Większość wody z kranu zawiera minerały korzystne dla wzrostu grzybów; jednak jeśli woda lokalna ma ekstremalne stężenie minerałów lub ma bardzo wysokie lub niskie pH, zastąp wodę destylowaną.
Ostrzeżenie
Przestrzegaj wszystkich instrukcji obsługi i bezpieczeństwa dotyczących używanego modelu szybkowaru. Podczas sterylizacji w szybkowarze pozostaw luźne pokrywki kolby, aby uniknąć nadciśnienia. Podczas pracy z pojemnikami na gorące media należy używać rękawic odpornych na ciepło. Nosić okulary ochronne podczas obsługi szybkowaru, usuwania sterylizowanego PDA i podczas nalewania.
Źródło zdjęcia: Zedcor Wholly Owned / PhotoObjects.net / Getty Images
Agar z dekstrozą ziemniaczaną (PDA) to dobra półstała pożywka ogólnego zastosowania używana do hodowli grzybów. Jest często używany do izolacji, wzrostu i utrzymania gatunków tworzących grzyby. Gotowe płytki Petriego lub probówki zawierające PDA można kupić lub PDA można szybko zrobić przy użyciu komercyjnej premiksu. Jednak nie jest trudno stworzyć prostą i skuteczną wersję od podstaw przy niewielkich kosztach.
Przygotowanie ekstraktu z ziemniaków
Krok 1
Umieść ziemniaki w rondlu z około 1,2 litra wody z kranu i gotuj na kuchence przez 1 godzinę.
Krok 2
Zdejmij rondel z ognia i poczekaj, aż płyn ostygnie, aż będzie można go wygodnie obchodzić (około 10 minut).
Krok 3
Wlać płynny ekstrakt ziemniaczany przez sitko lub ścierkę i zebrać go w innym pojemniku.
Przygotowanie podłoża
Krok 1
Dodaj dekstrozę i agar do 1 litra wody z ekstraktu ziemniaczanego.
Krok 2
Przetestuj pH roztworu za pomocą papieru testowego lub miernika pH.
Krok 3
Jeśli pH jest wyższe niż 6,5, zmniejsz je, dodając jedną kroplę roztworu kwasu chlorowodorowego na raz i ponownie testując.
Krok 4
Jeśli pH jest niższe niż 6, dostosuj je, dodając jedną kroplę roztworu wodorotlenku sodu na raz i ponownie testując.
Sterylizacja
Krok 1
Dokładnie wymieszaj pożywkę i podziel ją na mniejsze partie po 250 ml wlane do czterech kolb o pojemności 500 ml (uwaga: każda kolba nie może być wypełniona w więcej niż połowie, aby uniknąć zagotowania).
Krok 2
Przykryj każdą kolbę kawałkiem luźno zaciśniętej folii aluminiowej, aby folia nie spadła, ale nie tworzy szczelnego uszczelnienia.
Krok 3
Umieścić kolby w szybkowarze.
Krok 4
Używaj szybkowaru zgodnie z instrukcjami producenta, aby sterylizować PDA w temperaturze 121 stopni C (250 stopni F) pod ciśnieniem 103421 paskali (15 PSI) przez 15 minut.
Krok 5
Wyłącz szybkowar i pozwól mu powrócić do ciśnienia atmosferycznego, a następnie wyjmij kolby i pozwól im ostygnąć, aż będą mogły być obsługiwane.
Wylewanie medium
Krok 1
Ułóż sterylne płytki Petriego na płaskiej powierzchni.
Krok 2
Gdy kolby ostygną do temperatury roboczej, ale zanim medium zacznie się zestalać, chwyć kolbę jedną ręką, a drugą ręką zdejmij i odłóż jej foliowe wieczko.
Krok 3
Dla każdej szalki Petriego podnieś pokrywkę jedną ręką, szybko napełnij do połowy płynnym PDA i załóż pokrywkę.
Krok 4
Powtarzaj krok 3 powyżej, aż wszystkie potrawy Petriego zostaną napełnione.
Krok 5
Jeśli pozostały jakieś PDA, luźno odzyskaj kolbę z oryginalną foliową pokrywką, pozwól jej ostygnąć i zestalić się, dokręć pokrywkę foliową i przechowuj w lodówce.