Ako pripraviť zemiakový dextrózový agar
Veci, ktoré budete potrebovať
300 g olúpaných nakrájaných zemiakov
panvica
Kuchynské sitko alebo tenká sieťka
Testovací papier na pH alebo pH meter
1 molárna kyselina chlorovodíková
1 molárny hydroxid sodný
4 500 ml Ehrlenmayerove banky zo skla (alebo iné autoklávovateľné nádoby s úzkym hrdlom)
10 g dextrózového (glukózového) prášku
20 g agaru
Alobal
Tlakový hrniec
Sterilné Petriho misky
Tip
Väčšina húb sa darí dobre v mierne kyslých podmienkach, takže konečné pH by malo byť medzi 6 a 6,5, hoci môže byť upravené na akékoľvek pH, ktoré sa vyžaduje pre konkrétny druh. Viečka Petriho misky držte otvorené dosť ďaleko na to, aby bolo možné naliať médium a zakryť čo najrýchlejšie. Získanie rýchlosti a účinnosti pri nalievaní agaru do Petriho misiek vyžaduje určitý postup. Po ochladení a stuhnutí sa doštičky PDA môžu zabaliť do plastu a mesiace skladovať v chladničke. Väčšina vodovodnej vody obsahuje minerály prospešné pre rast húb; ak má miestna voda extrémne koncentrácie minerálov alebo má veľmi vysoké alebo nízke pH, destilovanú vodu nahraďte.
Výstraha
Dodržiavajte všetky prevádzkové a bezpečnostné pokyny pre použitý model tlakového hrnca. Pri sterilizácii v tlakovom hrnci nechajte viečka na fľaše uvoľnené, aby sa predišlo nadmernému tlaku. Pri manipulácii s obalmi s horúcimi médiami používajte rukavice odolné voči teplu. Pri prevádzke tlakového hrnca, odstraňovaní sterilizovaného PDA a počas liatia noste ochranné okuliare.
Obrázok Kredit: Zedcor úplne vlastnená / PhotoObjects.net / Getty Images
Agar zo zemiakovej dextrózy (PDA) je dobré polotuhé médium na všeobecné použitie, ktoré sa používa na kultiváciu húb. Často sa používa na izoláciu, pestovanie a udržiavanie húb vytvárajúcich druhov. Hotové Petriho misky alebo skúmavky obsahujúce PDA sa dajú kúpiť alebo sa PDA dajú rýchlo pripraviť pomocou komerčnej premixu. Nie je však ťažké vytvoriť jednoduchú a účinnú verziu od nuly za malú cenu.
Príprava extraktu zo zemiakov
Krok 1
Vložte zemiaky do panvice s približne 1,2 litra vody z vodovodu a varte na peci 1 hodinu.
Krok 2
Vyberte panvicu z tepla a nechajte tekutinu vychladnúť, až kým sa s ňou nebude pohodlne manipulovať (asi 10 minút).
Krok 3
Tekutý zemiakový extrakt nalejte cez sitko alebo tenkú kôš a zbierajte ho do inej nádoby.
Príprava média
Krok 1
Pridajte dextrózu a agar do 1 litra vody extrahovanej zo zemiakov.
Krok 2
Testujte pH roztoku pomocou papierika na testovanie pH alebo pH metra.
Krok 3
Ak je pH nad 6,5, upravte ho pridaním jednej kvapky roztoku kyseliny chlorovodíkovej a opakovaným testovaním.
Krok 4
Ak je pH nižšie ako 6, upravte ho pridaním jednej kvapky roztoku hydroxidu sodného naraz a opakovaným testovaním.
sterilizácie
Krok 1
Médium dôkladne premiešajte a rozdelte ho na menšie dávky po 250 ml naliate do štyroch 500 ml baniek (Poznámka: každá banka nesmie byť naplnená na viac ako polovicu, aby nedošlo k prevareniu).
Krok 2
Každú banku prikryte kúskom voľne zalisovanej hliníkovej fólie, aby fólia nespadla, ale nepriedušne utesnila.
Krok 3
Vložte banky do tlakového hrnca.
Krok 4
Prevádzkujte tlakový hrniec v súlade s pokynmi výrobcu, aby ste PDA sterilizovali pri 121 ° C (250 ° F) pri tlaku 103 421 Pascal (15 PSI) po dobu 15 minút.
Krok 5
Vypnite tlakový hrniec a nechajte ho, aby sa vrátil na atmosférický tlak, potom vyberte banky a nechajte ich vychladnúť, až kým sa s nimi nebude môcť manipulovať.
Nalievanie média
Krok 1
Sterilné Petriho misky umiestnite na rovný povrch.
Krok 2
Akonáhle sa banky ochladia na teplotu manipulácie, ale skôr ako médium začne tuhnúť, uchopte banku jednou rukou a druhou rukou odstráňte a odložte fóliové viečko.
Krok 3
Pre každú Petriho misku zdvihnite viečko jednou rukou, rýchlo naplňte tekutinu PDA do polovice a viečko nasaďte späť.
Krok 4
Opakujte vyššie uvedený krok 3, až kým nie sú všetky Petriho misky naplnené.
Krok 5
Ak zostane nejaký PDA, banku voľne izolujte s originálnym fóliovým vekom, nechajte vychladnúť a stuhnúť, utiahnite fóliové veko a uložte do chladničky.