Hur man gör Potato Dextrose Agar
Saker du behöver
300 g skalade, hackade potatis
Kastrull
Kökfilter eller ostduk
pH-testpapper eller pH-mätare
1 molär saltsyra
1 molar natriumhydroxid
4 500 ml Ehrlenmayer-kolvar (eller andra smalöglade autoklaverbara behållare)
10 g dextros (glukos) pulver
20 g agar
Aluminiumfolie
Tryckkokare
Sterila petriskålar
Dricks
De flesta svampar klarar sig bra under svagt sura förhållanden, så det slutliga pH-värdet bör vara mellan 6 och 6,5, även om det kan justeras till vilket pH-värde som krävs för en specifik art. Håll petriskålens lock öppna tillräckligt långt för att låta medium hällas in och täcka så snabbt som möjligt. Det krävs viss övning för att få fart och effektivitet i att hälla agar i petriskålar. Efter kylning och stelning kan PDA-plattor lindas i plast och förvaras i kylskåp i månader. De flesta kranvatten innehåller mineraler som är fördelaktiga för svamptillväxt; ersätter destillerat vatten dock om lokalt vatten har extrema mineralkoncentrationer eller har ett mycket högt eller lågt pH.
Varning
Följ alla bruks- och säkerhetsinstruktioner för modellen för tryckkokare som används. Låt kolven locka loss vid sterilisering i tryckkokaren för att undvika övertryck. Använd värmebeständiga handskar när du hanterar behållare med heta medier. Använd skyddsglasögon när du använder tryckkokaren, tar bort steriliserad PDA och under hällning.
Bildkredit: Zedcor helt ägt / PhotoObjects.net / Getty Images
Potatisdextrosagar (PDA) är ett bra halvfast material för allmänt bruk som används för odling av svamp. Det används ofta för att isolera, odla och underhålla svampbildande arter. Färdiga petriskålar eller provrör som innehåller PDA kan köpas, eller PDA kan snabbt tillverkas med en kommersiell förblandning. Det är dock inte svårt att skapa en enkel och effektiv version från början till liten kostnad.
Förbereda potatis extrakt
Steg 1
Lägg potatis i en kastrull med cirka 1,2 liter kranvatten och koka på en spis i en timme.
Steg 2
Ta bort kastrullen från värmen och låt vätskan svalna tills den kan hanteras bekvämt (cirka 10 minuter).
Steg 3
Häll flytande potatis extrakt genom en sil eller ostduk och samla den i en annan behållare.
Förbereda mediet
Steg 1
Tillsätt dextros och agar till 1 liter potatis extraktvatten.
Steg 2
Testa pH i lösningen med pH-testpapper eller en pH-mätare.
Steg 3
Om pH är över 6,5, justera det genom att tillsätta en droppe saltsyralösning åt gången och testa om igen.
Steg 4
Om pH är under 6, justera det genom att tillsätta en droppe natriumhydroxidlösning åt gången och testa om igen.
Sterilisering
Steg 1
Blanda mediet noggrant och dela upp det i mindre portioner om 250 ml som hälls i de fyra 500 ml-kolvarna (Obs: varje kolv får inte vara mer än halvfull för att undvika att koka över).
Steg 2
Täck varje kolv med ett stycke löst krusad aluminiumfolie, så att folien inte kommer att falla av utan gör en tät tätning.
Steg 3
Placera kolvarna i en tryckkokare.
Steg 4
Använd tryckkokaren i enlighet med tillverkarens instruktioner för att sterilisera PDA vid 121 grader C (250 grader F) vid ett tryck av 103,421 Pascals (15 PSI) i 15 minuter.
Steg 5
Stäng av tryckkokaren och låt den återgå till atmosfärstryck, ta sedan bort kolvarna och låt dem svalna tills de kan hanteras.
Hälla mediet
Steg 1
Ställ in de sterila petriskålarna på en plan yta.
Steg 2
När kolvarna har svalnat till hanteringstemperatur, men innan mediet börjar stelna, fattar du en kolv med ena handen och tar bort och lägger åt sidan dess folielock med den andra handen.
Steg 3
Lyft upp locket med en hand för varje petriskål, fyll snabbt halvvägs med flytande PDA och byt tillbaka locket.
Steg 4
Upprepa steg 3 ovan tills alla petriskålar är fyllda.
Steg 5
Om det finns någon PDA kvar, återställ lös kolven med dess ursprungliga folielock, låt den svalna och stelna, dra åt folielocket och förvara i kylskåp.